Porcin Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) är ett nyupptäckt enteriskt patogent svinvirus som kan orsaka vattnig diarré hos nyfödda smågrisar och orsaka betydande ekonomiska förluster för grisindustrin.För närvarande finns det ingen lämplig serologisk metod för att utvärdera effektiviteten av SADS-CoV-infektion och vaccin, så det finns ett akut behov av att använda en effektiv enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) för att kompensera för denna brist.Här konstruerades en rekombinant plasmid som uttrycker SADS-CoV spik (S)-protein sammansmält med human IgG Fc-domän för att producera rekombinant baculovirus och uttrycks i HEK 293F-celler.S-Fc-proteinet renas med protein G-harts och bibehåller reaktiviteten med anti-humana Fc- och anti-SADS-CoV-antikroppar.Sedan användes S-Fc-protein för att utveckla indirekt ELISA (S-iELISA) och optimera reaktionsförhållandena för S-iELISA.Som ett resultat, genom att analysera OD450nm-värdet för 40 SADS-CoV-negativa sera bekräftat med immunfluorescensanalys (IFA) och Western blotting, bestämdes cut-off-värdet till 0,3711.Variationskoefficienten (CV) för de 6 SADS-CoV-positiva serumen inom och mellan körningar av S-iELISA var alla mindre än 10 %.Korsreaktivitetstestet visade att S-iELISA inte har någon korsreaktivitet med andra svinvirussera.Dessutom, baserat på upptäckten av 111 kliniska serumprover, var den totala koincidensgraden för IFA och S-iELISA 97,3 %.Virusneutraliseringstestet med 7 olika OD450nm-värden av serum visade att OD450nm-värdet detekterat med S-iELISA var positivt korrelerat med virusneutraliseringstestet.Slutligen utfördes S-iELISA på 300 grisfarmserumprover.Kommersiella kit med andra enterovirus från svin visade att de IgG-positiva frekvenserna av SADS-CoV, TGEV, PDCoV och PEDV var 81,7 %, 54 % respektive 65,3 %., 6 %, respektive.Resultaten visar att S-iELISA är specifik, känslig och reproducerbar och kan användas för att detektera SADS-CoV-infektion i grisindustrin.Den här artikeln är skyddad av upphovsrätt.Alla rättigheter förbehållna.
Posttid: 22 juni 2021